陈光标8月25日20点10分微博配图。　　

　　陈光标8月22日微博配图。红圈位置系不同处。

　　陈光标8月25日20点10分发布微博，再次公布了冰桶挑战的照片。从照片上看，陈光标曾头顶冰块双眼紧闭，全身浸没在飘满冰块的水桶中，仅露出眼耳鼻。此外，另有一仪表插入水桶中。该微博称，“标哥今天再次向全社会宣布冰桶挑战一锤定音到此结束!要跟着标哥玩中国慈善的创新，温度表现在显示约零下20度。”

　　有媒体注意到，同8月22日陈光标发布的冰桶挑战照片比较，陈光标水桶背后的汽车部件配色略有不同。8月22日照片中车厢下方警示条系红白相间，8月25日照片中的相同部件则是纯红色，或可据此判断，这是陈光标的又一次冰桶挑战。

　　在陈光标8月25日所发微博评论中，网友们对“零下20度”一说普遍表示疑问，认为水中温度不应低于0度。

　　陈光标8月24日曾向澎湃新闻回忆了挑战时的过程和体验，他在零下20摄氏度的冰车里先待了20分钟，30桶水一桶桶往身上浇，“后来主持人跟我说要再坚持3分钟就30分钟了，我自己感觉20分钟还是有的，桶里的水虽然没有具体测温，但整体感觉水温比较刺骨，我浑身麻木，脸色后来发紫。”

　　陈光标告诉澎湃新闻，若是有人愿意捐出一千万做慈善，他愿意再试冰桶挑战，“至少保证在冰水里待20分钟，他们可以指定地点，带冰块来，找公证人。”

　　8月24日，新浪微博一位名叫“靠谱的冷眼观潮”的网友曾站出来叫板，决定对赌陈光标，如他在冰桶中待足30分钟，且出桶后独立行走100步，通过机构现场公证，该网友将砸锅卖铁给陈光标捐100万。“若陈光标不接受挑战一切都明了，并将100万捐给我。”该网友在微博上称。

　　上述提出对赌的网友引述专业人士说法称，一般人体在低温水域中的生存极限：穿着常服并保持静止，在海水中的存活时间：0℃以下海水，只能耐受几分钟;1℃海水，7分;2℃海水，15分;2.5℃海水，30分;5℃海水，60分;10℃海水，3小时，而能在0℃～4℃冰水混合物中坚持30分钟的人少数中的少数。